26 de abr. de 2011

Microscopio compuesto,Camara de Neubauer & Pipetas

Microscopio compuesto
 
El microscopio compuesto, que se ha hecho de uso general a partir de mediados del siglo XIX y que fue de importancia crucial para la microbiología como ciencia, es todavía, con ciertas variaciones, el principal apoyo de la investigación microbiológica rutinaria. Este tipo de microscopios esta formado básicamente por una parte mecánica y una parte óptica y es capaz de conseguir aumentos mayores que el microscopio construido con una sola lente

Parte Mecánica:
1. Pie o Base: Generalmente en forma de herradura o rectangular, es el apoyo de las demás piezas del microscopio. El pie debe ser sólido y pesado para asegurar su estabilidad.
2. Columna o Brazo: Este elemento relaciona el tubo del microscopio con el pie; sostiene la platina y el condensador y de ella se agarrará el microscopio cuando se traslada durante los trabajos. En algunos microscopios la columna es móvil
Figura
3. Tubo del Ocular: Está colocado en la parte superior del microscopio, donde están acoplados los oculares, que pueden tener movimiento vertical, con ayuda de una cremallera sobre la columna. En algunos microscopios el tubo del ocular es inclinado y se mantiene fijo, en este caso se mueve la platina.
4. Revólver o Disco Giratorio: Está debajo del tubo ocular donde están acoplados los objetivos, presenta movimiento giratorio para facilitar el cambio de un objetivo a otro.
5. Platina: Es una placa que puede ser cuadrada, circular o rectangular, con un orificio central que permite el paso de la luz a través de ella. Su función es sostener las placas con los preparados biológicos que se van observar
6. Carro: es un dispositivo ubicado sobre la platina, cuya función es sujetar y mover la placa que se va a estudiar. Posee dos tornillos que permiten movimientos horizontales (hacia adelante, hacia atrás, hacia la derecha y hacia la izquierda) del portaobjeto.
Cuando la platina carece del anterior dispositivo, lleva dos soportes para fijar
las placas llamadas ganchos o uñas.
7. Mecanismos de Movimiento: Está integrado por el tornillo macrométrico y el micrométrico
a. Tornillo Macrométrico: Acerca o aleja rápidamente el objetivo del preparado a observar; su función es lograr un enfoque más o menos claro o aproximado del objeto.
b. Tornillo Micrométrico: Acerca o aleja el objetivo del preparado, pero lentamente, casi imperceptiblemente, permite desplazamientos muy finos de la platina o del tubo del ocular. Durante la observación y enfoque este tornillo debe estarse moviendo permanentemente; su función es darle nitidez al enfoque

Parte óptica:
Esta integrada por los objetivos, oculares y el aparato de iluminación (espejo, diafragma, condensador y filtros). Estos elementos son los que permiten la iluminación, ampliación y la visión aumentada del objetivo.
1. Objetivo: Es la pieza más importante del microscopio. Ellos se acoplan mediante roscas estándar al revólver y pueden ser cambiados de posición con sólo rotarlos. Reciben el nombre de objetivos porque son los lentes que están más cerca del objeto. La mayoría de los microscopios tienen tres o cuatro objetivos. Las lentes de los objetivos son de aumentos diversos, los más usados son:
Objetivos de pequeños aumentos 3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos de grandes aumentos 40x, 45x, 50x y objetivos de inmersión 90x, 95x y 100x.
Las lentes de inmersión se emplean con aceite de inmersión para conectar la lente frontal (lente inferior del objetivo) al porta-objeto. Entre el objetivo y el objeto se produce una pérdida de luz por reflexión que se corrige adicionando al preparado unas gotas de aceite de cedro (aceite de inmersión) cuyo índice de refracción 1.515, es próximo al cristal. Este aceite también reduce o suprime por completo la refracción de los rayos de luz provenientes de la fuente luminosa.
a. Los objetivos secos: se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparación. En la cara externa llevan una serie de índices que indican el aumento que producen, la abertura numérica y otros datos. Así, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17, significa que el objetivo es planacromático, su aumento 40 y su apertura numérica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El número de objetivos varía con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos más frecuentemente utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.
b. El objetivo de inmersión: está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos círculos o anillos de color negro que rodea su extremo inferior.
2.Ocular: Están colocados en la parte superior del tubo ocular. Está formado por dos sistemas de lentes dispuestos de un cilindro. Su finalidad es aumentar la imagen dada por el objetivo y eventualmente corregir algunos defectos de la misma. Reciben dicho nombre porque son las lentes que se encuentran más cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x; 5x; 6,3x; 10x; 12.5x; 15x; 20x y 25x.
El aumento de la imagen de un objeto observado a través de un microscopio, se calcula multiplicando el número de aumento del objetivo con el cual se está trabajando por el número de aumento del ocular que se está utilizando.


Sistema de iluminación

1. Aparato de iluminación: Está conformado por la fuente de luz, el diafragma, el condensador y los filtros.
2. Fuente de luz: Puede ser natural o artificial, cuando es natural (solar) o procede de un foco luminoso situado fuera del microscopio, un espejo recoge la luz del medio y la refleja a través del objeto y del sistema de lentes. La luz artificial la constituye generalmente un bombillo ubicado en el microscopio y conectado a un circuito eléctrico de bajo voltaje.
3. Diafragma: Está ubicado entre la fuente de luz y el condensador, inmediatamente debajo de la platina, su función es regular la intensidad de luz que atraviesa el objeto. El diafragma tiene una palanquita que al moverla hacia delante o hacia atrás agranda o achica el orificio central, dejando pasar mayor o menor cantidad de luz respectivamente.
4. Condensador: Es un elemento cónico que posee un sistema de dos lentes convergentes que recogen o concretan los rayos luminosos para enviarlos al objetivo por el agujero de la platina.
Existe un tornillo manual que permite guardar la altura del condensador. Esta graduación es importante cuando se trabaja con objetivos de gran aumento (40x, 100x), ya que en la medida que se trabaja con éstos objetivos el condensador debe subirse. Lo contrario sucede cuando se trabaja con objetivos de menor aumento (4x, 10x).
5. Filtros: Entre la fuente de luz y el condensador de algunos microscopios existe un portafiltros en el cual se puede colocar filtros a voluntad del observador. Los filtros son elementos de cuarzo o de vidrio, pueden ser de color azul, amarillo o verde. Ellos interceptan el haz de rayos luminosos antes de entrar al condensador, esto se hace con el objeto de seleccionar un tipo de luz determinada para una experiencia dada.






 
Cámara de Neubauer



En biología celular es común el encontrarse con la necesidad de conocer el numero de células que se presente en un volumen dado; por ejemplo cuando se realizan cultivos celulares se precisa saber cuantas células se encuentran en un momento x (+1) con respecto al numero de células que inicialmente se sembraron. O bien para saber cuantos espermatozoides hay en los eyaculados de diferentes pacientes. En tales casos se requiere de un instrumento que permita contar directamente, o bien, calcular la concentración celular de un medio. No obstante, se cuenta con la Cámara de Neubauer, la cual es instrumento muy útil que permite contar células de distintos tamaños.

Cámara de Neubauer sin pinzas                Cámara de Neubauer con pinzas


 





Las cámaras de Neubauer se utilizan para determinar el número de partículas por unidad de volumen de un líquido. Las partículas leucocitos, eritrocitos, trombocitos, bacterias, esporas, polen etc. se cuentan visualmente con un microscopio. Consta de dos placas de vidrio, entre las cuales se puede alojar un volumen conocido de líquido. Una de las placas posee una grilla de dimensiones conocidas y que es visible al microscopio óptico. Para contar las células de un cultivo líquido, se agrega una gota de este entre estas dos placas y observar al microscopio óptico la cantidad de células presentes en un campo determinado de la grilla. Con base en la cantidad de células contadas, conociendo el volumen de líquido que admite el campo de la grilla, se calcula la concentración de células por unidad de volumen de la solución de medio de cultivo inicial.








La placa base en vidrio óptico especial tiene el tamaño de un portaobjetos. Las ranuras fresadas en la superficie de la placa base la dividen en dos zonas anchas exteriores y 3 campos pequeños interiores. A diferencia de las zonas exteriores, que se utilizan para rotulación, los campos interiores están esmerilados y pulidos. En el campo central (=fondo cámara) están grabadas dos cuadrículas de recuento separadas una de otra. El fondo de la cámara del campo central es usualmente 0,1 mm más bajo (profundidad cámara) que ambos campos adyacentes. Entre campo central y cubreobjetos ya colocado existe por tanto una ranura de 0,1 mm. La limitación lateral del volumen a contar se forma mediante las superficies imaginadas por la proyección vertical sobre las líneas exteriores de la cuadrícula de recuento.


Pipetas

Pipeta de Shali
Esta diseñada para determinar la cantidad de hemoglobina esta graduada.


Pipeta de Thoma
Pipeta graduada de cristal con incertidumbre de ±3 diseñada para funcionar como cuenta glóbulos












Cubrehematimetro
Esta diseñado para cubrir camara en la cuenta de leucitos, erictrocitos o plaquetas

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